2020-1-54-62

УДК 633.584.3:581.821.2]:615.07

Н. А. Кузьмичева

КОРА ИВЫ ОСТРОЛИСТНОЙ (SALIX ACUTIFOLIA Willd.) И ИВЫ ПУРПУРНОЙ (SALIX PURPUREA L. (s.l.)) КАК ИСТОЧНИК ИЗОСАЛИПУРПОЗИДА

Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет,

г. Витебск, Республика Беларусь

В статье изложены результаты макроскопического и хроматографического анализа коры ивы остролистной и коры трех видов ив, иногда рассматриваемых в объеме ивы пурпурной (s.l.): ивы Виноградова, пурпурной (s.s.) и эльбурской. Кора ивы остролистной отличается от остальных по цвету наружной поверхности и по отсутствию халконарингенина на ТСХ и ВЭЖХ. Доминирующим флавоноидом коры Salix acutifolia Willd. и S. purpurea L. (s.s.) является 6»-кумароил-изосалипурпозид (более 70 % от суммы веществ в извлечении). Это вещество не тождественно основному компоненту цветков бессмертника, как считалось ранее. В коре Salix Vinogradovii A.Skv. и S. elbursensis Boiss. преобладает изосалипурпозид (до 59 % от суммы), вторым по количественному содержанию следует 6»-кумароил-изосалипурпозид (до 28 % от суммы).

Ключевые слова:

Salix acutifolia, Salix purpurea, изосалипурпозид, 6»-кумароил-изосалипурпозид.

ВВЕДЕНИЕ

Кора ив используется в современной медицине в основном как источник салицилатов, обладающих жаропонижающим и противовоспалительным действием [1]. Но в коре различных видов ив, кроме производных салициловой кислоты, содержатся и другие действующие вещества. Так, в коре многих видов ив накапливаются значительные количества фенилпропаноидов (салидрозид, триандрин и др.) [2], обладающих анксиолитическим, ноотропным, адаптогенным и иммуномодулирующим действием [3–5]. Присутствуют разнообразные флавоноиды из классов флаванов, флавонов, халконов и ауронов [2], обладающие широким спектром фармакологической активности. В том числе в коре ивы остролистной и ивы пурпурной обнаружен изосалипурпозид, аналогичный основному действующему веществу цветков бессмертника песчаного (содержание более 1,5 %), которые обладают желчегонным действием [6].

Изосалипурпозид представляет собой халкон, 2-О-глюкозид халконарингенина. Он был выделен еще в 1969 году из коры ивы остролистной, тогда же была установлена его структура [7] (рисунок 1).

Практически одновременно такое же вещество было обнаружено в коре ивы пурпурной [8, 9]. В дальнейшем неоднократно было подтверждено наличие изосалипурпозида в коре этих двух видов ив как основного вещества халконовой природы, в том числе и методом ВЭЖХ [10–13].

В связи с острой дефицитностью сырья бессмертника и повсеместным распространением ивы остролистной и ивы пурпурной являются актуальными исследования коры этих видов в качестве источника лекарственного растительного сырья, альтернативного бессмертнику, с выраженной желчегонной и гепатопротекторной активностью.

Ива остролистная – невысокое дерево или древовидный кустарник с тонкими ветвями красно-бурого (иногда ярко-красного) цвета с сизым налётом. Цветет в конце марта -начале апреля. Распространена в Западной и Восточной Европе, растет в поймах рек, предпочитает песчаные почвы [14]. По территории Беларуси проходит северная граница сплошного распространения Salix acutifolia, она практически совпадает с изолинией суммы температур выше 10^оС, равной 2400 градусов [15]. Широко культивируется как декоративное растение.

Ива пурпурная – кустарник высотой до 2–4 м. Кора, как и у ивы остролистной, внутри лимонно-жёлтая; снаружи с сизоватым налётом. Полиморфный вид, который многие систематики делят на три более мелких вида: ива пурпурная в узком понимании (Salix purpurea L. (s.s.)), ива Виноградова (Salix Vinogradovii A.Skv.) и ива эльбурская (Salix elbursensis Boiss.). Различия этих видов связаны в основном со строением генеративных органов [14, 16]. В вегетативном состоянии и в период сокодвижения (рекомендованное время заготовки коры) отличить указанные виды затруднительно, поэтому некоторыми авторами они рассматриваются как один вид Salix purpurea L. (s.l.) [13, 17, 18].

Однако географически эти виды разобщены. Ареал S. purpurea включает Северную Африку и умеренную климатическую зону Евразии. Произрастает преимущественно по берегам рек. В 80-х годах прошлого века восточная граница сплошного распространения ивы пурпурной в Республике Беларусь проходила от устья реки Дисны в пойме Западной Двины до города Березино и южнее [15]. В настоящее время в связи с увеличением средних температур зимних месяцев эта граница сместилась на северо-восток приблизительно на 100 км, и ива пурпурная сейчас встречается в пойме Днепра и в верховьях Западной Двины. В степной зоне Украины и России Salix purpurea s.s. замещается Salix Vinogradovii, а на Кавказе – Salix elbursensis [2, 14, 16].

Кору ивы (Salicis сortex) [19] заготавливают с побегов всех видов ив во время сокодвижения, хотя, на наш взгляд, более целесособразно заготавливать кору ив во время цветения – плодоношения [20]. Возраст побегов для сбора коры у разных авторов отличается весьма существенно – от 2–3 до 6–7 лет. При заготовке сначала срезают молодые ветви, а потом с них снимают кору. Сырье может содержать цельные побеги текущего года или однолетние. Сушка воздушно-теневая или тепловая при температуре 50–60 °С.

Поскольку разрешены к заготовке все виды ив, описание внешних признаков коры ивы в Государственной фармакопее [19] весьма неопределенное и не содержит диагностических признаков, позволяющих идентифицировать отдельные виды.

Целью работы являлось изучение внешних признаков и химического состава коры ивы остролистной и ивы пурпурной.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектами исследования являлись образцы коры ивы пурпурной и ивы остролистной, заготовленные после срезки однолетних и двулетних ветвей по общепринятой методике. Ветви срезали в южной части кроны на высоте 1,3–1,5 м во время цветения (образец из Южной Осетии в августе) в 2017–2018 гг. Сушка воздушно-теневая. Местонахождения естественных популяций ив указаны в таблице 1.

Макроскопический анализ проводили по методике Государственной фармакопеи Республики Беларусь (ГФ РБ II) [21]. Хроматографический анализ по методике ГФ РБ II, с. 1233 [19] не позволяет отличить кору ивы остролистной от коры ивы пурпурной, поэтому была разработана методика ТСХ-анализа с детекцией флавоноидов, а не фенолгликозидов. Использовали метод одномерной тонкослойной хроматографии на пластинках TLC Silicagel 60 F₂₅₄Merck. Извлечение флавоноидов из коры ив и цветков бессмертника проводили с помощью 70 % этанола в соотношении 1 : 10 без нагревания, настаивая в течение 7 суток [12]. По 5 мкл полученных извлечений наносили на пластинки с тонким слоем силикагеля. Условия разделения суммы флавоноидов коры ивы пурпурной подбирали экспериментально. Были изучены следующие системы растворителей:

1) этилацетат – уксусная кислота – вода (8 : 1 : 1);

2) этилацетат – муравьиная кислота – вода (5 : 1 : 1);

3) ацетон – этанол – вода – аммиак (9 : 2 : 1 : 2);

4) ацетон – этанол – вода – аммиак (18 : 4 : 1 : 3);

5) ацетон – этанол – вода – аммиак (14 : 4 : 1 : 2).

Флавоноиды обнаруживали путем просматривания в УФ-свете, а также путем помещения пластинок на несколько секунд в 1 % раствор 2-аминоэтилового эфира дифенилборной кислоты. Зоны, соответствующие флавоноидам, окрашивались в желтый цвет.

Исследования проводили методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе Agilent 1100 c колонкой Zorbax SB-C18 длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной октадецильным силикагелем с размером зерен 5 мкм. Температура колонки 30^оС, изократический режим, подвижная фаза из ацетонитрила и фосфатного буферного раствора с рН = 3 в соотношении 1 : 4, скорость подачи подвижной фазы 1 мл/мин, длина волны детекции 360 нм. В качестве объекта сравнения использовали цветки бессмертника песчаного, основным компонентом суммы флавоноидов которых является изосалипурпозид [2].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Макроскопический анализ. Кора ивы остролистной представлена трубчатыми или желобоватыми кусками коры толщиной 1–2 мм; они различной длины, гибкие, изогнутые. Haружная поверхность коры гладкая, цвет от темно-красного до красновато-бурого с сизым восковым налетом различной степени выраженности (у побегов текущего года цвет светло-желтый). Чечевички светло-серые, округлые, многочисленные. Внутренняя поверхность лимонно-желтая, гладкая. Излом снаружи мелкощетинистый, внутри грубоволокнистый.

Кора ивы пурпурной состоит из кусков трубчатой или желобоватой формы различной длины, толщиной до 2 мм, гибких, изогнутых или перекрученных. Наружная поверхность желтовато-серая, матовая, внутренняя – лимонно-желтая. Излом снаружи мелкощетинистый, внутри грубоволокнистый.

Хроматографический анализ. ТСХ-анализ показал, что в системах растворителей №1–3 подвижность основных компонентов цветков бессмертника и коры двух видов ив практически совпадает, но в системах 4–5 R_f веществ отличается (таблица 2), что не может говорить об их тождественности.

Такие же результаты были получены и при ВЭЖХ-анализе (рисунок 2). Время удерживания основного компонента суммы флавоноидов цветков бессмертника 37,01 мин, в то время как для основного вещества коры ивы остролистной – 27,02 мин, а для коры ивы пурпурной – 26,65мин.

Эти вещества, несомненно, очень близки по структуре, поскольку их спектры практически идентичны (рисунок 3). Однако, судя по их хроматографическому поведению и основываясь на литературных данных, можно сделать вывод, что в коре ивы остролистной и пурпурной основным компонентом является 6"-кумароил-изосалипурпозид. Это вещество сравнительно недавно было выделено из коры ивы остролистной [12], его спектральные данные близки к изосалипурпозиду: изосалипурпозид λ_max = 227, 315, 372 нм; 6"-кумароил-изосалипурпозид λ_max= 227, 317, 370 нм.

Полученные данные не соответствуют литературным [9–13], поэтому дополнительно были проанализированы с помощью ВЭЖХ образцы коры ивы пурпурной из Российской Федерации и Южной Осетии. Данные о времени удерживания основных компонентов извлечений из коры ив и их относительному содержанию приведены в таблице 3.

Очевидно, что образцы ивы пурпурной разделились на две группы: в первой (образцы № 2 и 3 из окр. г. Витебска и г.Рыбинска) присутствует только 6"-кумароил-изосалипурпозид, в то время как во второй группе (образцы № 4 и 5 из г. Курска и Южной Осетии соответственно) доминирует изосалипурпозид, который сопровождается его кумароильным производным. Во всех образцах коры ивы пурпурной присутствует также вещество с временем удерживания 58–60 минут. Спектр его представлен на рисунке 4. По хроматографическому поведению и УФ-спектру можно предположить, что это вещество – агликон изосалипурпозида халконарингенин.

По-видимому, несоответствие полученных данных ранее опубликованным связано с генетически обусловленной различной способностью к синтезу и накоплению изосалипурпозида и его производных у разных видов ив. Так, в степной зоне Украины и России Salix purpurea s.s. замещается Salix Vinogradovii, а на Кавказе – Salix elbursensis [14, 16]. Различия этих видов (по А.К.Скворцову) связаны в основном со строением генеративных органов [14]. В вегетативном состоянии и в период сокодвижения (рекомендованное время заготовки коры) отличить указанные виды не представляется возможным, поэтому некоторыми авторами они рассматриваются как один вид Salix purpurea s.l.

По нашим данным, химический состав коры Salix purpurea s.s. отличается от коры Salix Vinogradovii и Salix elbursensis, что не позволяет считать их тождественными, однако этот вопрос требует дальнейших исследований. Особый интерес вызывает нахождение в верховьях Волги образца коры ивы пурпурной, сходного по составу флавоноидов с заготовленным в Республике Беларусь, хотя по современным литературным данным в Поволжье произрастает ива Виноградова [16].

Что касается коры Salix acutifolia, то на хроматограммах, полученных с помощью метода ВЭЖХ, в извлечении из коры ивы остролистной обнаружен только 6"-кумароил-изосалипурпозид (таблица 3). На хроматограммах, полученных с помощью ТСХ на силикагеле в системе растворителей ацетон – этанол – вода – аммиак (18 : 4 : 1 : 3), видно, что большинство компонентов суммы совпадают с найденными у Salix purpurea s.s. и имеют сходную хроматографическую подвижность (таблица 4). Исключение составляет вещество № 3, отсутствующее в извлечении из коры ивы остролистной. Его наличие, таким образом, является диагностическим для коры ивы пурпурной. Кроме того, вещество № 5 на хроматограмме извлечения из коры ивы остролистной представлено значительно более ярким пятном.

На хроматограммах, полученных с помощью метода ВЭЖХ, в извлечении из коры ивы пурпурной обнаруживается дополнительный пик, которого нет в извлечении из коры ивы остролистной.

Таким образом, по результатам хроматографического анализа извлечений из коры ивы остролистной и пурпурной удалось установить основной компонент, которым является 6"-кумароил-изосалипурпозид. Это вещество не идентично основному компоненту цветков бессмертника, как предполагалось ранее, но очень близко к нему по структуре (является его кумароил-производным) и, возможно, обладает теми же фармакологическими свойствами.

6"-кумароил-изосалипурпозид резко доминирует в сумме флавоноидов, составляя 96,5 % в коре ивы остролистной и 71,7 % в коре ивы пурпурной. Вторым по количественному содержанию компонентом коры ивы пурпурной является агликон изосалипурпозида халконарингенин (15,5 % от суммы). В коре ивы остролистной он отсутствует, поэтому может служить диагностическим веществом для отличия кор этих двух видов ив друг от друга. В коре ивы Виноградова и ивы эльбурской присутствуют как изосалипурпозид (51–59 % от суммы), так и 6"-кумароил-изосалипурпозид (22–28 % от суммы флавоноидов).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Макроскопическим диагностическим признаком, позволяющим отличить кору ивы остролистной от коры ивы пурпурной, является цвет наружной поверхности коры. Цвет внутренней поверхности коры и характер ее излома у этих видов ив совпадают, но могут служить диагностическим признаком для отличия от остальных видов ив.

На хроматограммах, полученных с помощью ТСХ на силикагеле в системе растворителей ацетон – этанол – вода – аммиак (18 : 4 : 1 : 3), вещество с Rf = 0,40 присутствует только в извлечениях из коры ивы пурпурной и является, таким образом, диагностическим для ее идентификации по сравнению с корой ивы остролистной.

По результатам ВЭЖХ-анализа извлечений из коры Salix acutifolia и S. purpurea s.s. их основным компонентом является 6"-кумароил-изосалипурпозид. Это вещество не тождественно основному компоненту цветков бессмертника, как предполагалось ранее, но очень близко к нему по структуре (является его кумароил-производным) и, возможно, обладает теми же фармакологическими свойствами.

6"-кумароил-изосалипурпозид резко доминирует в извлечении из коры ивы остролистной (до 96,5 % от суммы). В коре ивы пурпурной он также преобладает (71,7 % от суммы) и сопровождается халконарингенином (15,5 % от суммы). В извлечениях из коры ивы Виноградова и ивы эльбурской основным веществом является изосалипурпозид (до 59 % от суммы), вторым по количественному содержанию следует 6"-кумароил-изосалипурпозид (до 28 % от суммы).

SUMMARY

A. Kuzmichоva

BARK OF SALIX ACUTIFOLIA WILLD AND SALIX PURPUREA L. (s.l.)

AS THE SOURCE

OF ISOSALIPURPOSIDE

Vitebsk State Order of Peoples' Friendship Medical University

Vitebsk, The Republic of Belarus

The article deals with results of macroscopic and chromatographic analysis of willow bark and the bark of three species of willow including Salix acutifolia Willd., S. purpurea L. (s.s.), Salix Vinogradovii A.Skv. and S. elbursensis Boiss. Bark of Salix acutifolia differs from the others by the color of its outer surface and by the absence of chalconaringenin on TLC and HPLC. The dominant flavonoid of willow bark Salix acutifolia Willd is 6" O-p-coumaroyl-isosalipurposide in two species: of S. acutifolia and S. purpurea (s.s.) (more than 70 % from the total in the extraction). This flavonoid is not identical to the main component of Helichrysum flowers as it was considered before. Isosalipurposide is dominant in the bark of two species: Salix Vinogradovii A.Skv.and S. elbursensis Boiss (up to 59 % from the sum), the next by the quantitative content is 6"- O-p-coumaroyl-isosalipurposide (up to 28 % from the sum).

Keywords:

Salix acutifolia, Salix purpurea, isosalipurposide, 6"-O-p-coumaroyl-isosalipurposide.

ЛИТЕРАТУРА:

Насонов, Е. Л. Применение нестероидных противовоспалительных препаратов и ингибиторов циклооксигеназы-2 в начале XXI века/ Е. Л. Насонов // Российский медицинский журнал. – 2003. – Т. 11, № 7. – С. 375–379.
Растительные ресурсы России. Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. Т. 2. Семейства Actinidiaceae – Malvaceae, Euphorbiaceae – Haloragaceae / Отв. ред. А.Л. Буданцев. СПб; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2009. – С. 79–86.
Фенилпропаноиды – перспективные биологически активные вещества лекарственных растений/ Г. Г. Запесочная [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. – 1995. – Т. 29, №4. – С. 47–50.
Анксиолитическая активность некоторых фитопрепаратов и фенилпропаноидов/ В. А. Куркин [и др.] // Растительные ресурсы. – 2007. – Т. 43, вып. 3. – С. 130–139.
Ноотропная активность некоторых фитопрепаратов и фенилпропаноидов/ В.А.Куркин [и др.] // Растительные ресурсы. – 2007. – Т. 43, вып. 2. – С. 76–88.
Куркина, А. В. Определение содержания изосалипурпозида в сырье и препаратах бессмертника песчаного / А. В. Кур-кина, В. М. Рыжов, Е. В. Авдеева // Химико-фармацевтический журнал. – 2012. –

Т. 46, № 3. – С. 28–33.

Винокуров, И. И. Свойства и структура халконового гликозида из коры остролистной ивы (Salix acutifolia Wild.) / И. И. Винокуров, А. И. Скриган // Весцi Акадэмii навук Беларускай ССР, 1969. – № 5. – С. 112–114.
Thieme, H. Ǜber die Flavonoide der Salixrinden und Blӓtter / H. Thiem // Pharmazie.– 1969. – Jahrg. 24. – H.1. – S. 56.
Компанцев. В. А. Флавоноиды коры Salix elbursensis / В. А. Компанцев // Химия природных соединений.– 1969.– № 4. – С. 323–324.
Identification and determination of eight phenolic glucosides in Salix purpurea and Salix daphnoides with modern HPLC / B. Meier [et al.] // Pharm. Acta Helv. – 1985. – Vol. 60, № 9–10. – P.269–270.
Фенольные соединения коры Salix acutifolia / Г. Г. Запесочная [и др.] // Химия природных соединений. – 2003. – № 4. – С. 263–266.
Бонцевич, А. И. Фитохимическое исследование коры ивы остролистной: автореф. дис. … канд. фарм. наук: 15.00.02 / Самарский госуд. мед. университет. – Самара, 2007. – 25 с.
Химическое изучение побегов ивы пурпурной (Salix purpurea L.) и определение противовоспалительной активности их водного извлечения [Электронный ресурс] / О. О. Фролова [и др.] // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 6. – Режим доступа: http://www.science-education.ru/ru/ article/view. – Дата доступа: 22.04.2019.
Скворцов, А. К. Ивы СССР / А. К. Скворцов. – М.: Наука, 1968. – С. 226–228.
Парфенов, В. И. Ивы (Salix L.) в Белоруссии: таксономия, фитоценология, ресурсы / В. И. Парфенов, И. Ф. Мазан. – Минск: Наука и техника, 1986. – 167 с.
Валягина-Малютина, Е. Т. Ивы Европейской части России / Е. Т. Валягина-Малютина. М.: Тов. науч. изд. КМК, 2004. – 217 с.
Логинова, Л. А. Продуктивность и энергетический потенциал ивовых ценозов на примере Воронежской области: дис. … к.б.н.: 03.02.08 / Л. А. Логинова. – Воронеж. – 2010. – 148с.
Бородина, Н. В. Сравнительный анализ фенольных соединений побегов Salix caprea L., S. purpurea L. и S. viminalis L. Флоры Украины / Н. В. Бородина, В. Н. Ковалев // Фенольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты. Сборник материалов IX Международного симпозиума. – Москва, 20–25 апреля 2015 г. / Отв. ред. Н.В. Загоскина. – М.: ИФР РАН, 2015. – С. 27–33.
Государственная фармакопея Республики Беларусь (ГФ РБ II): Разработана на основе Европейской фармакопеи. В 2 т. Т. 2. Контроль качества субстанций для фармацевтического использования и лекарственного растительного сырья / М-во здравоохранения Респ. Беларусь, УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. С.И.Марченко. – 2-е изд. – Молодечно: Тип. «Победа», 2016. – С. 1233–1234.
Созинов, О. В. Сезонная и разногодичная изменчивость содержания биологически активных веществ в коре Salix viminalis (Salicaceae) в Беларуси / О. В. Созинов, Н.А.Кузьмичева // Растительные ресурсы. – 2016. – Т. 52, вып. 4. – С. 610–619.
Государственная фармакопея Республики Беларусь. (ГФ РБ II): Разработана на основе Европейской фармакопеи. В 2 т. Т. 1. Общие методы контроля качества лекарственных средств / М-во здравоохр. Респ. Беларусь, УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. А. А. Шерякова. – Молодечно: Типография «Победа», 2012. – 1220 с.